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面對新冠病毒措手不及的攻擊,在人群中的高傳染性,快速確定感染者阻斷傳染源成為防疫的關鍵手段,新冠病毒核酸檢測速度快(4~6小時)、準確性好以及成熟的檢測條件成為確診新冠肺炎的“金標準”,那么一份新冠核酸檢測報告到底是怎么做出來的呢?

首先核酸是什么?它是構成生物體最基本的物質,根據化學組成不同可分為脫氧核糖核酸和核糖核酸。

脫氧核糖核酸其實就是我們平時所說的DNA,它儲存著生物體所有的遺傳信息,就像是生命的“藍圖”。我們熟知的乙肝病毒就是DNA病毒,而流感病毒、新冠病毒的遺傳物質時RNA,即核糖核酸。所以對新冠病毒的核酸檢測,其實就是對病毒的遺傳物質RNA進行檢測。

目前我們采用的主流的方法是實時熒光RT-PCR,全稱是逆轉錄-聚合酶鏈式反應。那么,實時熒光RT-PCR這種黑科技是如何“捕捉”到新冠病毒的呢?;玖鞒淌牵翰杉瘶颖?-->提取RNA--->逆轉錄成cDNA--->PCR擴增--->結果分析。

1、首先是采集樣本:

由于新冠病毒通過呼吸道傳播,因此樣本主要從呼吸道采集,目前常規的呼吸道樣本類型大致有兩類:一類是用咽拭子、鼻拭子在人的上呼吸道(咽部和鼻腔)擦拭采集;另一類是收集下呼吸道痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。當然也可以經血液,糞便檢查病毒核酸。

通常肺泡灌洗液的病毒載量要高于鼻咽拭子,而鼻咽拭子中的病毒載量又高于血液樣本。采集到的樣本將被嚴格低溫封存,送到指定實驗室,在哪里新冠病毒的“蛛絲馬跡”都將會被找到。

2、從樣本中提取病毒的RNA:

病毒很狡猾,它將自己的這些“保密文件”都包裹在細胞核里,因此,檢測人員會在樣本中加入核酸提取試劑,把病毒的蛋白質破壞,讓核酸釋放出來。

3、將病毒RNA“逆轉錄”成cDNA:

通過逆轉錄技術(RT),把病毒的RNA“逆轉”成一種特異的DNA,即cDNA,此步驟是由于病毒RNA結構極不穩定,容易降解,所以先把病毒RNA逆轉錄成穩定的cDNA。

這個過程由核酸檢測試劑盒中一種叫“逆轉錄酶”的物質催化合成,完成轉錄后,cDNA正式“粉墨登場”。

4、PCR擴增:

用檢測試劑盒里的一些特殊試劑來擴增cDNA。讓cDNA不斷復制,使其數量呈指數級式增長。這里用到的方法就是PCR,全稱聚合酶鏈式反應。在擴增的同時,會產生與擴增數量相當的熒光信號,信號的產生是試劑盒里一種叫做熒光探針的東西,它會釋放熒光信號,每擴增成為一條DNA鏈,就會有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的積累與PCR產物形成完全同步。

PCR檢測儀能記錄到一個熒光信號增加的CT值(到達預先設定閥值的循環數)檢測人員就是通過檢測熒光信號來判斷樣本中是否有病毒核酸。

5、熒光信號結果分析:

熒光PCR儀監測出熒光到達的CT值與病毒核酸濃度有關,病毒核酸濃度越高CT值越小。

如果樣本中有新冠病毒,那么在cDNA完成預訂次數的擴增后,檢測儀記錄的CT值就會形成一個逐漸上升的S形曲線,檢測結果為陽性;如果沒有類似的S型曲線,檢測結果就位陰性。

新冠核酸檢測流程中的每一個環節都至關重要,容不得半點馬虎,從采集樣本,運送標本再到實驗室檢測,每位人員都經過了嚴格培訓。這樣才完事了一份新冠病毒核酸檢測報告。


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